Finalizada la segunda ronda del Mutua Madrid Open 2025, un total de nueve cabezas de serie cayeron en su debut en la capital de España. La derrota más destacada fue la de Novak Djokovic ante matteo Arnaldi (6-3 6-4), aunque la más espectacular fue la que protagonizó Arthur Fils a manos de Francisco Comesaña (7-6 6-4), ya que el argentino remontó un 1-5 en contra en el marcador. Los demás cabezas de serie eliminados, al detalle:
Alexander Bublik ganó a Alexei Popyrin 6-4 7-6
Benjamin Bonzi ganó a Hubert Hurkacz 6-4 7-5
Juan Manuel Cerúndolo ganó a Felix Auger-Aliassime 7-6 6-4
Flavio Cobolli ganó a Holger Rune 6-2 WO
Alexandre Muller ganó a Ugo Humbert 6-2 6-7 7-6
Damir Dzumhur ganó a Sebastián Báez 1-6 6-1 6-2
Matteo Arnaldi ganó a Novak Djokovic 6-3 6-4
Jacob Fearnley ganó a Tomas Machac 1-6 6-3 6-2

